ارزیابی تروپیسم بافتی و بیماری‌زایی سه جدایه ویروس آنفلوانزای پرندگان تحت تیپ H9N2 در جوجه‌های عاری از عوامل بیماری‌زای خاص

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 بخش پاتولوژی و اپیدمیولوژی مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران

2 بخش تحقیق و تولید واکسن و فرآو.رده‌های بیولوژیک طیور، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران

3 بخش تحقیق و تشخیص بیماری‌های طیور، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران

چکیده

تحت تیپ H9N2 آنفلوانزای پرندگان جزو ویروس‌های مهم از نظر اقتصادی در صنعت طیور خاورمیانه بوده و در ایران نیز به صورت اندمیک شده است. مطالعه حاضر به منظور بررسی تروپیسم بافتی و بیماری‌زایی 3 جدایه مختلف از ویروس‌H9N2  انجام شد. بدین منظور 84 جوجه یک روزه  SPF به طور تصادفی به چهار گروه مساوی (21 جوجه در هر گروه) در ایزولاتورهای جداگانه با فشار هوای مثبت تقسیم شدند. جوجه‌های 30 روزه در گروه‌های 1، 2 و 3 با 106EID50  از سه ویروس H9N2 جدا شده در سال‌های مختلف از مرغداری‌های گوشتی ایران به روش چشمی- بینی تلقیح شدند، گروه چهارم به‌عنوان شاهد با مایع آلانتوئیک تلقیح شدند. در روزهای 2، 4، 6، 8، 10 و 12 پس از تلقیح نمونه‌ها شامل سواب کلواکی، سواب حلقی -دهانی و بافت‌های مختلف جمع‌آوری شدند. از روش Real-time PCR برای شناسایی ویروس در نمونه‌های بافت و سواب استفاده شد. ویروس H9N2  در تمام بافت‌ها در روزهای 2، 4 و 6 پس از تلقیح به استثنای کبد و تیموس شناسایی شد. حداکثر ضایعات هیستوپاتولوژیک نای، ریه، کبد، کلیه، طحال، لوزه سکوم و تیموس در روزهای 2 تا 8 مشاهده گردید. ضایعات در سایر بافت‌ها از جمله لوزه‌های سکومی و کلواک چندان برجسته نبود. در بررسی ایمونوهیستوشیمی، وجود آنتی‌ژن ویروس آنفلوانزا در سلول‌های اپیتلیال بافت‌های ریه، کلیه و روده در روزهای 4 و 6 پس از تلقیح مشاهده شد. بر اساس نتایج به دست آمده شدت بیماری‌زایی سه ویروس مورد مطالعه تقریباً مشابه، کم و فاقد تلفات با علائم خفیف تنفسی و دپرسیون بود. با این حال دیده شده که علی‌رغم بیماری‌زایی کم ویروس‌های H9N2 تظاهر علائم بالینی عفونت با این ویروس در گله‌های تجاری بسیار متغیر و بعضاً با تلفات و خسارات اقتصادی مهمی همراه است.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Assessment of parthenogenesis and tissue tropism of three H9N2 avian influenza virus isolates after experimental infection in Specific-Pathogen-Free chickens

نویسندگان [English]

  • Mohammad Eslampanah 1
  • Najmeh Motamed 2
  • Hamid Shoushtari 3
1 Pathology department, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and extension organization, Karaj, Iran
2 Poultry vaccines research and production department , Razi Vaccine and Serum Research Institute, Ag-ricultural Research, Education and extension organization, Karaj, Iran
3 Poultry diseases research and diagnostic department , Razi Vaccine & Serum Research Institute, Agricul-tural Research, Education and extension organization, Karaj, Iran
چکیده [English]

Avian influenza virus (AIV) subtype H9N2 is one of the most important AIV in poultry around the world. An experiment was carried out for studying the pathogenicity of three H9N2 isolates. Eighty four one-day-old SPF chickens were divided randomly into “four groups (21 chicks per group)” in separate isolators with positive Air pressure. At the age of 30 days-old chickens in group 1,2, and 3 were inoculated with 106EID50 of three H9N2 isolates by oculo-nasal route, 4th group was kept as control and inoculated with mock allantoic fluid. Samples including oropharyngeal and cloacal swabs and various tissues were collected at 2, 4, 6, 8, 10 and12 days post-inoculation (PI). The Real-time PCR assay was used for detection of the virus swab and tissue samples. In experiment groups, H9N2 AIV was detected from all examined tissues in 2, 4 and 6 dpi, exception was liver and thymus. Maximum histopathological lesions were seen from 2 till 8 dpi in trachea, lung, liver, kidney, spleen, cecal tonsil and thymus eventually. Lesions in other tissues including cecal tonsils, and cloaca was not significant. In immunohistochemical investigation, the presence of antigen in the epithelial cells of lung, kidney and intestinal tissues, was observed on 4 and 6 days post inoculation. Considering the fact that H9N2 viruses are of low pathogenicity but they show various clinical signs in commercial flocks. The results of this study showed that there was some pathogenic differences between three isolates but the differences were not significant.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Avian influenza virus
  • H9N2 subtypes
  • Immunohistochemistry
  • Real time RT-PCR
  • SPF chicken
1- Alexander DJ. Report on Avian Influenza in the Eastern Hemisphere During 1997–2002. 2003;47 %. J Avian Diseases(s3): 792-7, 6.
2- Kandeil A, Gomaa MR, Shehata MM, El Taweel AN, Mahmoud SH, Bagato O, et al. Isolation and Characterization of a Distinct Influenza A Virus from Egyptian Bats. Journal of virology. 2019; 93(2): e01059-18.
3- Capua I, Alexander DJ. Avian influenza: recent developments. Avian Pathology. 2004; 33(4): 393-404.
4- Guo YJ, Krauss S, Senne DA, Mo IP, Lo KS, Xiong XP, et al. Characterization of the Pathogenicity of Members of the Newly Established H9N2 Influenza Virus Lineages in Asia. Virology. 2000; 267(2): 279-88.
5- Kim JA, Cho SH, Kim HS, Seo SH. H9N2 influenza viruses isolated from poultry in Korean live bird markets continuously evolve and cause the severe clinical signs in layers. Veterinary microbiology. 2006; 118(3): 169-76.
6- Naeem K, Ullah A, Manvell RJ, Alexander DJ. Avian influenza A subtype H9N2 in poultry in Pakistan. 1999; 145(19): 560-.
7- Nili H, Asasi K. Natural cases and an experimental study of H9N2 avian influenza in commercial broiler chickens of Iran. Avian Pathology. 2002; 31(3): 247-52.
8- Gharaibeh S. Pathogenicity of an Avian Influenza Virus Serotype H9N2 in Chickens. 2008;52 %. Avian Diseases(1): 106-10, 5. [In Persion]
9- Mirzaei SeyedGholamreza SH, Nouri Abbas. Development and Evaluation of Real-Time RT-PCR Test for Quantitative and Qualitative Recognition of Current H9N2 Subtype Avian Influenza Viruses in Iran. Archive of Razi Institute. 2018; 73(3): 177-82. [In Persion]
10- Mosleh N, Dadras H, Mohammadi A. Evaluation of H9N2 avian influenza virus dissemination in various organs of experimentally infected broiler chickens using RT-PCR %. Iranian Journal of Veterinary Research. 2009; 10(1): 12-20. [In Persion]
11- Riel Dv, Munster VJ, Wit Ed, Rimmelzwaan GF, Fouchier RAM, Osterhaus ADME, et al. H5N1 Virus Attachment to Lower Respiratory Tract. 2006; 312(5772): 399.
12- Bano S, Naeem K, Malik S. Evaluation of Pathogenic Potential of Avian Influenza Virus Serotype H9N2 in Chickens. Avian diseases. 2003; 47: 817-22.
13- Kwon J-S, Lee H-J, Lee D-H, Lee Y-J, Mo I-P, Nahm S-S, et al. Immune responses and pathogenesis in immunocompromised chickens in response to infection with the H9N2 low pathogenic avian influenza virus. Virus Research. 2008; 133(2): 187-94.
14- Slemons RD, Swayne DE. Nephrotropic Properties Demonstrated by A/Chicken/Alabama/75 (H4N8) Following Intravenous Challenge of Chickens. Avian Diseases. 1992; 36(4): 926-31.
15- Swayne DE, Radin MJ, Hoepf TM, Slemons RD. Acute Renal Failure as the Cause of Death in Chickens Following Intravenous Inoculation with Avian Influenza Virus A/Chicken/Alabama/7395/75 (H4N8). Avian Diseases. 1994; 38(1): 151-7.
16- Slemons RD, Swayne DE. Replication of a Waterfowl-Origin Influenza Virus in the Kidney and Intestine of Chickens. Avian Diseases. 1990; 34(2): 277-84.
17- Manjili S, Haghdoost I, Mortazavi P, Habibi H, Lashini H, Saberfar E. Detection of H9N2 avian influenza virus in various organs of experimentally infected chickens. African journal of microbiology research. 2011; 5. [In Persion]
18- Hadipour M. Seroprevalence Survey of H9N2 Avian Influenza Virus in Backyard Chickens around the Caspian Sea in Iran. Revista Brasileira De Cirurgia Cardiovascular - REV BRAS CIR CARDIOVASC. 2010; 12.
19- Pazani J, Vasfi Marandi M, Ashrafihelan J, Marjanmehr S, Farid G. Pathological Studies of A / Chicken / Tehran / ZMT - 173/99 (H9N2) Influenza Virus in Commercial Broiler Chickens of Iran. International Journal of Poultry Science. 2008; 7. [In Persion]
20- Banani M MR, Pourbakhsh SA. Simultaneous isolation of Ornithobacterium rhinotracheal and avian influenza virus subtype H9N2 from commercial poultry. Iranian Journal of Veterinary Research 2002; 3(2): 190-5. [In Persion]
21- Swayne DE, Slemons RD. Comparative Pathology of a Chicken-origin and Two Duck-origin Influenza Virus Isolates in Chickens: The Effect of Route of Inoculation. Veterinary Pathology. 1994; 31(2): 237-45.
22- Aamir UB, Wernery U, Ilyushina N, Webster RG. Characterization of avian H9N2 influenza viruses from United Arab Emirates 2000 to 2003. Virology. 2007; 361(1): 45-55.
23- Bonfante F, Mazzetto E, Zanardello C, Fortin A, Gobbo F, Maniero S, et al. A G1-lineage H9N2 virus with oviduct tropism causes chronic pathological changes in the infundibulum and a long-lasting drop in egg production. Veterinary Research. 2018; 49(1): 83.