بهینه‌سازی استخراج لیپو‌پلی‌ساکارید سویه خشن بروسلاآبورتوس به روش فنل-کلروفورم-پترولیوم اتر

نوع مقاله: مقاله پژوهشی

نویسندگان

چکیده

بیماری بروسلوز یک بیماری مشترک بین انسان و دام بوده که یک تهدید برای بهداشت عمومی و همچنین صنعت پرورش دام  محسوب می‌شود.هدف از این مطالعه بهینه‌سازی روشاستخراج لیپو پلی‌ساکارید بروسلا آبورتوس سویه خشن که می‌توان از آن به ‌عنوان آنتی‌ژن در تست‌های سرولوژیک جهت تشخیص گاوهای واکسینه با این واکسن استفاده نمود.این مطالعه کاربردی در آزمایشگاه تحقیق و تولید بخش  بروسلوز انجام شد. به این منظور ابتدا سویه خشن با روش کشت در محیط اختصاصی بروسلا آگار تکثیر و با روش PCR مورد تأیید نهایی قرار گرفت و لیپو پلی‌ساکارید خشن باکتری بروسلا آبورتوس به روش فنل - کلروفورم - پترولیوم اتر استخراج گردید و نتایج حاصل از استخراج LPS  خشن به کمک روش‌های LAL و SDS – PAGE مورد تائید قرار گرفت.در روش فنل - کلروفورم - پترولیوم اتر لیپو پلی‌ساکارید خشن پس از استخراج و ترسیب با محلول متانول تست LAL صورت گرفت که ایجاد لخته، نشانگر وجود LPS بود. همچنین الکتروفورز در ژل (پلی آکریلامید 14 درصد) با رنگ‌آمیزی نیترات نقره باندی کمتر از 14 کیلو دالتون مشاهده گردید. بر اساس این مطالعهروش فنل - کلروفورم - پترولیوم اتر یک روش ایده آل جهت استخراج لیپو پلی‌ساکارید خشن (R-LPS) سویه خشن بوده و برای تهیه آنتی‌ژن در تست‌های سرولوژیک و همچنین کیت الایزا جهت تشخیص گاوهای واکسینه با این واکسن استفاده می‌شود.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Optimization of Rough Lipopolysaccharide Extraction from Brucella abortus by Phenol – Chloroform - Petroleum ether

نویسندگان [English]

  • Saeed Alamian
  • Armin Kalantari
چکیده [English]

Brucellosis is an important zoonotic disease which threatens public health and livestock industry. The aim of this study was to optimize extraction of rough lipopolysaccharide from Brucella abortus which can be used as the antigen for the development of serological tests to diagnose animals vaccinated.This applied study was performed in the Brucellosis Research and Production Laboratory. For this purpose, the rough strain was cultured in Brucella agar specific medium and final diagnosis by PCR method. The rough lipopolysaccharide of Brucella abortus was extracted by phenol-chloroform-petroleum ether method and the results of rough LPS extraction were approved.by LAL and SDS - PAGE methods. Extractin and precipitation of Lipopolysaccharide with cold methanol and sodium acetate was perform by using Phenol – Chloroform - Petroleum ether method. Then Lipopolysaccharide identified by Limulus Amebocyte Lysate ( LAL ) test which formation of clots indicative presence of Lipopolysaccharide.  Also SDS – PAGE ( 14 %  Polyacrylamide gel ) followed by silver nitrat staining showed a 12 KDa band which indicative Rough Lipopolysaccharide. According to the results of this study it seems that Phenol – Chloroform - Petroleum ether method is an excellent method for extraction of rough LPS of antigen for the development of serological tests and ELISA Kit to diagnose animals vaccinated.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Brucella abortus
  • Rough Lipopolysaccharide
  • LAL
  • SDS-PAGE